Апоптоза, као вид ћелијске смрти, основни је генетски програмиран механизам за контролу броја ћелија и одржавање хомеостазе ткива, којим се успоставља равнотежа између пролиферације, диференцијације и одумирања ћелија. Процес апоптозе одликује низ морфолошких и биохемијских промена: активација иницијаторских и ефекторних каспаза, кондензација и фрагментација хроматина, пупљење ћелијске мембране, формирање апоптотских тела. Може бити покренута спољашњим, рецептор-зависним путем или унутарћелијским сигналима који покрећу унутрашњи, митохондрија-завистан пут. Кључну улогу у регулацији процеса апоптозе имају протеини Bcl-2 фамилије протеина.

Mутације гена укључених у регулацију апоптозе, механизми којима малигне ћелије избегавају апоптозу, смањена апоптоза или појава резистенције играју важну улогу у карциногенези, расту и регресији канцера. Супротно, апоптоза игра важну улогу у терапији тумора, као један од главних механизама дејства антитуморских агенаса.

Специфична лабораторијска испитивања механизама апоптозе:

• Одређивање вијабилности ћелија и цитотоксичности БАС (IC₅₀ вредности) – MTT тест и xCELLigence Real-Time Cell Analyzer (RTCA) instrument;
• Одређивање типа ћелијске смрти, визуелизација и одређивање процента ране, касне апоптозе и некрозе – Aкридин оранж/Eтидијум бромид микроскопска метода и Flow цитометрија;
• Одређивање параметара апоптотских сигналних путева:
  • активност каспаза 8 и 9 – колориметријске методе;
  • протеинска експресија Fas рецептора и каспазе 9 – имунофлуоресценца;
  • експресија гена укључених у регулацију процеса апоптозе (Bax, Bcl-2 и BclX), Fas-L и каспазе 9 – Multiplex PCR и qPCR метода.

Референце:

1.     Милена Ћурчић. Молекуларни механизми апоптозе у ћелијама карцинома колона након in vitro третмана екстрактима лековитих биљака. Докторска дисертација, Природно-математички факултет, Универзитет у Крагујевцу. 2014. 1-194.

2. Milutinović М, Stanković М, Cvetković D, Maksimović V, Šmit B, PavlovićR, Marković S. The molecular mechanisms of apoptosis induced by Allium flavum and synergistic effects with new-synthesized Pd(II) complex on colon cancer cells. Journal of Food Biochemistry, 2015; 9: 238-250. ISSN: 0145-8884.
3. Ćurčić M, Stanković M, Mrkalić E, Matović Z, Banković D, Cvetković D, Đačić D, Marković S. Antiproliferative and proapoptotic activities of methanolic extracts from Ligustrum vulgare as an individual treatment and in combination with palladium complex. International Journal of Molecular Sciences, 2012; 13: 2521-2534. ISSN: 1422-0067.
4. Никодијевић Данијела. Ефекти екстраката биљака из родаTeucrium на механизме апоптозе у ћелијама карцинома дојке и колона. Мастер рад, Природно-математички факултет, Универзитет у Крагујевцу. 2015. 1-60.
5. Nikodijević D, Milutinović M, Cvetković D, Stanković M, Živanović M, Marković S. Effects ofTeucrium polium and Teucrium montanum L. extracts on mechanisms of apoptosis in breast and colon cancer cells. Kragujevac Journal of Science, 2016; 38: 147-159.ISSN: 1450-9636.